Cobas 4800 HPV检测的Ct值反映的型别特异性HR⁃HPV亚型病毒载量与子宫颈病变关系的研究

  • 发布时间:2019-09-09
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  • 作者:妇产科空间 2019-09-09
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01目的

探讨Cobas 4800 HPV(Cobas 4800)检测的循环阈值(Ct值)反映的型别特异性高危型HPV(HR⁃HPV)亚型病毒载量与子宫颈病变的关系。

02方法

2016年8月—2017年9月在深圳市龙岗区布吉街道募集有性生活的非妊娠期妇女7 000例,以细胞学检查联合HR⁃HPV检测进行子宫颈癌筛查,细胞学检查采用液基薄层细胞学检查(TCT)HR⁃HPV检测采用Cobas 4800检测方法,可检测14种HR-HPV亚型,包括HPV 16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68型,对于筛查阳性者回叫行阴道镜下子宫颈活检病理诊断。将Cobas 4800检测中反映病毒拷贝数的Ct值作为反映HR⁃HPV病毒载量的指标(Ct值越大则病毒载量越低),分析型别特异性的HR⁃HPV亚型病毒载量与子宫颈病变程度的关系。

03结果

(1)接受子宫颈癌筛查的7 000例妇女中,筛查阳性者370例,回叫后行阴道镜下子宫颈活检325例,回叫率为87.8%(325/370)。325例行阴道镜下子宫颈活检的妇女中,病理诊断为正常子宫颈119例、低级别鳞状上皮内病变(LSIL)151例、高级别鳞状上皮内病变(HSIL)及以上病变(HSIL+)55例(包括HSIL 53例、子宫颈原位腺癌1例、子宫颈鳞癌1例)。
(2)325例行阴道镜下子宫颈活检妇女中,病理诊断为正常子宫颈、LSIL、HSIL+妇女的HPV 16型的Ct值分别为35.4±4.5、31.0±6.0、26.5±4.0,3者比较,差异有统计学意义(F=25.537,P=0.000);Pearson相关分析显示,HPV 16型的Ct值与子宫颈病变程度呈显著负相关关系(r=-0.617,P=0.000),即HPV 16型病毒载量与子宫颈病变程度呈显著正相关关系。HPV 18型的Ct值与子宫颈病变程度无显著相关性(r=-0.021,P=0.902),即HPV 18型病毒载量与子宫颈病变程度无显著相关性。病理诊断为正常子宫颈、LSIL、HSIL+妇女的其他12种HR⁃HPV亚型的Ct值分别为33.0±5.3、29.9±7.2、29.8±5.8,3者比较,差异有统计学意义(F=5.087,P=0.007);其中LSIL、HSIL+均显著低于正常子宫颈(P<0.05),但LSIL与HSIL+比较无显著差异(P>0.05);Pearson相关分析显示,其他12种HR⁃HPV亚型的Ct值与子宫颈病变程度呈显著负相关关系(r=-0.194,P=0.007),即其他12种HR⁃HPV亚型病毒载量与子宫颈病变程度呈显著正相关关系。

04结论

高致瘤亚型HPV 16型病毒载量随着子宫颈病变严重程度的增高而升高,两者呈显著正相关关系。反映型别特异性HR⁃HPV亚型病毒载量的Cobas 4800检测中的Ct值有望作为HR⁃HPV筛查阳性者的分流与判断预后的指标。

05关键词

人乳头瘤病毒16;病毒载量;宫颈肿瘤;癌前状态;预后



讨论


一、关于HPV病毒载量临床意义的争议

HR⁃HPV感染是导致子宫颈癌前病变及其进展为子宫颈癌的必要条件。现已公认,HPV 16、18型感染具有很高的致癌性。除HR⁃HPV持续感染外,病毒载量提示子宫颈癌发病的价值一直存在很大争议。有学者认为,HPV病毒载量是HPV致癌的另1个关键的独立因素;而更多的学者则认为,HPV病毒载量与子宫颈病变的发生及进展无关。以往大量文献报道的临床研究未显示HR⁃HPV病毒载量与子宫颈病变之间存在相关关系[5⁃6]。据此,有学者提出了子宫颈病变程度越重,病变细胞作为宿主复制病毒的能力越差的学说,用以解释HPV病毒载量与子宫颈病变无关。虽然也有结果相反的报道[7⁃8],但持否定意见的观点在相当长的时间内占据主导地位,临床上多不主张进行HPV病毒载量的检测。HPV病毒载量的相关研究得出了截然相反的结果,分析其原因有如下几点:(1)目前尚无标准统一的HPV 病毒载量的定量检测方法,各研究采用的不同检测方法间存在差异;(2)不同研究项目对HPV病毒载量的定义不一致,如检测的病毒在子宫颈病变中为游离状态、整合状态及两者的混合状态;(3)研究设计方案及样本量的差异,使各研究之间缺乏可比性;(4)在病例对照研究和横断面研究中,无法确定HPV感染和持续的时间,限制了HPV病毒载量与子宫颈病变关系的分析;(5)针对HPV病毒载量的研究多采用子宫颈脱落细胞作为检测标本,由于不同个体取到的细胞数量的差异大,并且标本中混杂黏液、血液及杂质,检测样本缺少质控,因而检测结果难以反映真实的HPV病毒载量。

本研究组的多项研究表明,HR⁃HPV病毒载量越高,发生子宫颈病变的风险和病变程度就越高[7,9]。特别是沈媛媛等[9]应用微切技术准确获取不同程度子宫颈病变组织行HPV 定量检测的研究,为HPV病毒载量作为关键的独立致癌因素提供了实验证据。近年来,国内外越来越多的研究支持HPV病毒载量在肿瘤发生、发展中具有关键的作用[8,10],HPV亚型病毒载量可作为子宫颈癌的1个型别特异性生物学指标的观点[11⁃13]逐步被接受,更多的研究尝试以HPV病毒载量预测病毒清除及疾病进展[14]。

二、HPV病毒载量的检测技术

临床上针对HPV病毒载量的研究多采用子宫颈脱落细胞作为检测标本,由于临床采样质控困难,多数临床试验只能进行半定量检测[15]。多重荧光定量PCR技术通过检测人体有核细胞内的看家基因获得单位细胞的病毒载量,可更进一步反映真实的病毒感染程度,是目前公认的准确的定量检测技术[16]。Cobas 4800检测是1种集自动样品制备与实时PCR技术检测的多重定性技术,其能够单独出具HPV 16型和HPV 18型两种亚型的检测结果以及其他12种HR-HPV亚型的混合检测结果,虽然Cobas 4800是HPV定性检测技术,但其能提供病毒拷贝数的Ct值。Marta等[17]应用Cobas 4800检测中提供的Ct值,通过在大肠埃希菌中构建的1个质粒,其含有HPV 16型的450 bp的L1基因片段,绘制病毒拷贝数与Ct 值的标准曲线,证实了Cobas4800检测也适合于评估HPV病毒载量。本研究将Cobas 4800检测中的Ct值作为HR⁃HPV亚型病毒载量的评价指标,在大样本人群筛查中评估了HPV16、18型和其他12种HR⁃HPV亚型病毒载量与子宫颈病变程度的关系,获得型别特异性的HR-HPV病毒载量与子宫颈病受程度相关的满意结果。

Cobas 4800检测是目前唯一被美国食品药品管理局(FDA)批准用于人群子宫颈癌筛查的HPV检测技术,在其原有的检出HPV 16、18型及其他12种HR⁃HPV亚型的基础上提示其病毒载量,进一步拓展了该检测技术提示致癌风险的效用。

三、型别特异性HR-HPV亚型病毒载量
检测的临床意义

鉴于HR⁃HPV持续感染是引起子宫颈癌前病变及子宫颈癌的重要因素,因此,有关病毒载量的研究必须建立在HPV分型的基础上,从HPV感染的自然过程中获取有价值的信息,解释病毒载量与子宫颈病变的相关性。尽管目前的研究还不充分,但基本确定HPV亚型病毒载量与子宫颈病变的关系与HPV型别有关。本研究结果提示,不同HPV亚型的Ct值在HPV单一亚型感染和混合感染妇女没有差异,这说明了HPV感染的状态并不决定病毒载量的高低。型别特异性的HR-HPV亚型病毒载量与子宫颈病变程度有关,本研究结果显示,LSIL、HSIL+中HPV 16型的Ct值低于正常子宫颈,且HSIL+低于LSIL,即LSIL、HSIL+中HPV 16型病毒载量明显高于正常子宫颈,且HSIL+中病毒载量最高;HPV 16型的Ct值与子宫颈病变程度存在显著负相关关系,也就是说HPV 16型病毒载量与子宫颈病变严重程度呈显著正相关关系,与Long等[8]的研究结果一致。HPV 18型也是主要的致癌亚型,本研究中HPV 18型的Ct值在不同程度子宫颈病变中无统计学差异,即未发现HPV 18型病毒载量与子宫颈病变的相关关系。文献中也有类似的报道[18]。由于本研究中HPV 18型感染所致的子宫颈病变例数较少,尚需更多研究证实。HPV 16、18型以外的其他12种HR⁃HPV亚型(即非HPV 16、18型)的Ct值在LSIL、HSIL+中低于正常子宫颈。其原因可能在于HPV 16、18型以外的其他12种HR⁃HPV亚型本身的致瘤性相对较弱,因而导致其致瘤过程与病变进程的特殊性。本研究还发现,HPV 16型和其他12种HR⁃HPV亚型混合感染的妇女中,HSIL+妇女的HPV 16 型的Ct 值明显低于其他12 种HR⁃HPV亚型的Ct值,即在HPV 16型共同感染所致HSIL+中HPV 16型的病毒载量明显高于其他12种HR-HPV 亚型的病毒载量,表明,在混合感染中,HPV 16型是导致子宫颈癌及子宫颈癌前病变的最主要的HPV型别,具有更强的致瘤性。

综上,本研究通过大样本量人群筛查数据探讨了HR-HPV亚型病毒载量与子宫颈病变的关系,发现导致子宫颈病变的高致瘤HPV 16型的病毒载量与发生子宫颈癌及其癌前病变的关系更为密切,即型别特异性的病毒载量可能具有更重要的临床意义。反映型别特异性的HR-HPV亚型病毒载量的Cobas 4800检测中的Ct值有望作为HR-HPV筛查阳性妇女的分流与判断其预后的指标。